Содержание

Монтаж привода для секционных ворот: видео, инструкция

Установка автоматики достаточно простой процесс, провести который можно самостоятельно. Если же возникает необходимость в максимально длительном использовании, лучше поручить дело профессионалу. Для проведения всех необходимых работ потребуется небольшой набор инструментов, немного времени и желаемый набор автоматики. Этого будет достаточно, чтобы необходимость ручного открытия ворот отпала навсегда. Достаточно смонтировать секционные ворота, правильно подобрать силовую установку, а с остальным поможет инструкция по монтажу.


Рисунок 1: Установка автоматики для секционных ворот

Этапы проведения монтажа привода

Весь процесс проведения работ по монтажу можно разделить на несколько этапов. Каждый из них важен для успешного завершения и функционирования всей установки. Необходимо всего лишь выполнить такие действия:


Рисунок 2: Этапы монтажа привода

  • размещаем на верху сэндвич панелей кронштейн крепления автоматики, расположив его по центру;
  • устанавливаем кронштейн концевой направляющей на расстоянии не менее 5 см от конца полотна ворот в открытом состоянии;
  • фиксируем рейку болтом;
  • кронштейн крепления направляющих к потолку закрепляем на рейки и фиксируем при помощи косынки;
  • одеваем голову силовой установки;
  • закрепляем с помощью фиксирующих болтов;
  • с помощью втулки и шпринтов крепим тягу каретки привода к кронштейну панели;
  • проводим настройку автоматики.

Монтаж привода секционных ворот требует соблюдение инструкции. Необходимо заранее позаботиться о наличии необходимых инструментов: молотка, отвертки, уровня, дрели, гаечных ключей. Тщательно подготовьте поверхности, ведь погрешность в горизонтальных уровнях может составлять не больше 0,1 см.

Возможные сложности при проведении работ

Перед выполнением работ необходимо убедиться в наличии необходимого запаса места для установки комплектующих. В случае его отсутствия выполнение задачи будет невозможным. Монтаж автоматики на секционные ворота необходимо проводить с соблюдением всех правил безопасности. Это связано с тем, что приводится установка в действие с помощью электричества. Также стоит учитывать материал, из которого изготовлен потолок. Необходимо обеспечить высокую прочность фиксации конструкции к потолку, и, если необходимый уровень обеспечить не удается, использовать специальные профили.

Рисунок 3: Сложности при монтаже привода

Когда монтаж электропривода и автоматики на ворота проведен верно, не возникает никаких сложностей с работой.

Если возникли неполадки и ворота не открываются или не закрываются, необходимо проверить правильность проведения подключения всех комплектующих, а также еще раз обратить внимание на автоматику.

Установка автоматики на секционные ворота:


Установка автоматики CAME (Италия, Гарантия 36 мес.) в Симферополе

Установка и монтаж автоматики для распашных и откатных ворот

Те кто уже смог оценить преимущества установки автоматики на откатные или распашные ворота – отмечают комфорт и надежность такого решения. Обратившись в нашу компанию Вы можете получить комплексную услугу: купить автоматику для ворот в Симферополе и заказать ее профессиональный монтаж. Наши специалисты имеют опыт установки автоматики для распашных ворот и монтажа откатных приводов с гарантией их работоспособности и долговечности.

Чтобы быть уверенными в том, что воротная автоматика будет эксплуатироваться максимально бережно и безопасно – процесс ее установки всегда стоит доверять профессионалам. Именно такие профессионалы работают в компании ПКФ Автоматика.

Монтаж автоматики для откатных ворот 


Почему стоит заказать установку автоматики

Благодаря высоким рабочим характеристикам, длительному сроку службы и достойному уровню комфорта, стоимость оборудования оправдывает себя многократно.

Немаловажным является и усиленная защита от взлома, которую предоставляет качественная автоматика для ворот. Таким образом, существенно повышается безопасность владельца и его собственности. Кроме того, установить автоматику на ворота – это престижно, а благодаря возможности программирования системы управления современных моделей оборудования – очень удобно для каждого пользователя.


Функция обнаружения препятствий позволяет автоматически прекращать закрытие створки при взаимодействии с посторонними предметами, а различное дополнительное оборудование повышает уровень безопасности работы.

Наша компания предлагает услугу установки разных моделей автоматики для промышленных, гаражных, откатных, секционных и распашных ворот ведущих мировых производителей. Очень важно использовать именно проверенное временем оборудование, которое способно на длительную бесперебойную работу благодаря уникальным техническим решениям и качественным механизмам, позволяющим эффективно работать в самых сложных погодных условиях. Не менее важно, чтобы монтаж этого оборудования осуществлялся профессионалами своего дела — к которым относятся сотрудники нашей компании.

Монтаж автоматики для распашных ворот

На сегодня лидерами по объемам поставок на отечественный рынок являются следующие компании: HORMANN, CAME. Остановимся более подробно на каждом из производителей.


Немецкое оборудование HORMANN обеспечивает полную безопасность благодаря различным запатентованным технологиям. Особый способ блокировки ворот, работающий даже при отключенном электричестве, позволяет защитить полотно от поддевания снизу. Плавность пуска и остановки значительно снижает нагрузку на большинство механизмов, продлевая общий срок службы всей системы.

Итальянская автоматика CAME очень надежна и отличается высокой эффективностью при работе в сложных условиях. Ассортиментный ряд продукции данного производителя насчитывает несколько десятков тысяч наименований.

Заказать установку автоматики Hormann, CAME на ворота в Симферополе может любой желающий, достаточно связаться с нашим менеджером. Благодаря минимальным срокам поставки, высокому качеству продукции и приемлемым ценам, приобретение и монтаж автоматики для ворот у нас станет настоящей находкой для любого покупателя.


Приводы для распашных ворот гидравлические FAAC 400 CBAC

Состав комплекта:
Привод Faac 400 CBAC: 1 компл.
Приемник Baisheng: 1 шт.
Пульт Faac XT4 433 RC: 2 шт.
Фотоэлементы Faac XP20B D: 1 компл.
Энкодер Faac SAFEСODER: 2 шт.

Линейная автоматика Faac 400 CBAC предназначена для распашных ворот с шириной створки до 2.2 метров и весом до 1500 кг. Подходит для объектов с интенсивным транспортным потоком (до 70 циклов в час). Оборудование относится к гидравлическому типу, устойчиво к холодным погодным условиям. Питание двигателя — 230В. Дополнительная шумоизоляция. Гидравлическая блокировка при открытии/закрытии. Конечные положения автоматика определяет по механическим упорам. Самоблокирующийся принцип работы.

Особенности привода FAAC 400 SBS для распашных ворот
  • Привод распашных ворот FAAC 400 CBAC подходит для тяжелых и промышленных ворот, к тому же этот вариант отлично подходит для распашных ворот интенсивного использования.
  • Привод FAAC 400 CBAC оснащен гидравлическим замком, который блокирует створки распашных ворот в открытом и закрытом положениях, что исключает попытки несанкционированного проникновения.
  • Привод обеспечивает бесшумный ход, что является его преимуществом.
  • Автоматика оснащена устройством разблокировки, закрывающимся на ключ.

Привод FAAC 400 CBAC относится к автоматике для распашных ворот, а значит обеспечивает открывание и закрывание створок ворот для проезда транспорта или прохода человека и изоляции территории. Рекомендуемая ширина створки таких ворот составляет 2,2 м, а максимальная — 5 м. Весить створка ворот должна до 1500 кг. В случае, если ширина створки более 2,2 м, необходимо установить электромеханический замок. Соотношение ширины и массы створки распашных ворот можно посмотреть в инструкции по монтажу и эксплуатации.

Привод FAAC 400 CBAC гидравлический линейный, мощность 230 В. Предназначен привод для тяжелых распашных ворот. Автоматика FAAC, в том числе привод FAAC 400 CBAC, подходит для использования в зимних условиях и адаптирована к климату России — рассчитана на эксплуатацию при температурах -40° C до +55° C.

Монтаж автоматики распашных ворот своими руками

Установка автоматики для распашного вида ворот является процессом довольно трудоемким, который требует особой скрупулезности, аккуратности, а также квалификации. Даже некоторые опытные монтажники, работающие на крупные фирмы, иногда допускают ошибки, что приводит в дальнейшем к неправильному функционированию ворот. Если же автоматику откатного типа можно установить просто на основании и выставить необходимый зазор, расположенный между звездочкой привода и рейкой, то автоматика для распашных ворот своими руками устанавливается с соблюдением большого количества различных норм, таких как расположение кронштейна:

— на створке,
— на столбе.

Нужно учитывать и расположение створки по отношению к столбу и упоры для створок, в случае если автоматика применяется без использования концевых выключателей. Игнорирование хотя бы одного из параметров непременно приведет к вырыванию кронштейнов от створок или даже от столбов, к поломке электродвигателя и иным неприятным последствиям.

Помимо этого распашная автоматика обладает огромным количеством электроподключений и выставляемых на управленческой плате параметров функционирования. Все эти факторы сводят к минимуму возможность верной установки автоматики распашных ворот своими руками неподготовленным людям.

Но если трудности вас не смущают и вы желаете самостоятельно провести автоматизацию своих ворот, то необходимо придерживаться следующей инструкции.

С ЧЕГО НАЧАТЬ?

Это, конечно же, набор инструментов:

дрель;
плоскогубцы;
отвертка либо шуруповерт с насадками;
рулетка;
изолента;

Вначале следует определиться с типом автоматики. Она бывает линейной и рычажной. Для того чтобы определить используемый тип, необходимо уточнить расстояние между петлей и внутренним краем столба. Если он 0-150 мм, то можно остановиться на линейном варианте.

Такая автоматика обойдется намного дешевле, смотрится она эстетичнее за счет того, что не имеет рычагов. Если же расстояние составило 150-300 мм, то придется устанавливать рычажную автоматику либо делать специальные ниши для линейного привода, чтобы подогнать размер под соответствие.

После того как автоматика (вид) была определена, необходимо продолжить подбор подходящего комплекта. Для этого следует измерить ширину створки и прикинуть возможную ветровую нагрузку.

Установка автоматики для распашных ворот своими руками пугает очень многих. Более того, даже некоторые специалисты, которые занимаются этим не один год, не желают связываться с установкой распашки.

Но все это из-за недостатка знаний и опыта. Можно считать, ее установка не сложнее откатной, а в целом ряде случаев даже проще.

Прежде всего, следует проверить легкость створочного хода. Необходимо держать под контролем данный параметр, т. к. хорошо установленные и верно отрегулированные створки ворот обязаны открываться движением пальца.

Если это далеко не так, то стоит поискать причину, которая может быть в перекосе створки, столба, плохо смазанной петле и т. п. Все перекосы необходимо сразу же устранить, т. к. все приводы должны двигаться строго по уровню, а из-за того что столб наклонен, траектория тоже отклонится от горизонта, что неблагоприятно скажется на автоматике.

После того как все недочеты были исправлены, следует приступать к монтированию на столбы автоматики. Все размеры для установки подробно изложены в прилагаемой инструкции. Желательно неукоснительно следовать всем рекомендациям завода.

РАСПАШНЫЕ ВОРОТА, КОТОРЫЕ ОТВОРЯЮТСЯ ВНУТРЬ, СВОИМИ РУКАМИ

Достаточно простая функция самоблокировки привода позволяет отказаться от применения дополнительных устройств – замков, засовов, фиксаторов.

Открывание внутрь — это классическая схема. Здесь будут уместны как линейные, так и рычажные приводы. Если вы берете за основу стальные столбы, изготовленные из швеллера либо из профилированной трубы, то наилучшим вариантом будут линейные привода CAME ATI3000. Они и стоят дешевле, и надежнее, и места меньше занимают.

Рычажной вид привода тоже будет здесь уместен, но из-за своей более высокой стоимости он реже применяется. Плохо дело, если у вас бетонные либо кирпичные колонны, а сами ворота установлены в центре такой колонны, т. е. углублены более чем на 5 см от начала столба.

В этом варианте линейный привод совсем не подойдет. Но зато рычажная автоматика может монтироваться прямо на столб, а рычаги позволят открыть ворота, которые были установлены на расстоянии до 20 см от краевой линии столба.

РАСПАШНЫЕ ВОРОТА, КОТОРЫЕ ОТКРЫВАЮТСЯ НАРУЖУ, СВОИМИ РУКАМИ

Здесь лучше применять линейную автоматику CAME ATI5000 из-за соотношения цена-качество. Устанавливать ее следует внутри проема. Она отнимает приблизительно по 15 см с каждой стороны. Если ворота довольно узкие, то автоматика устанавливается сверху, что гарантирует беспрепятственное использование распашных ворот.

Особое внимание при монтировании автоматики для распашных ворот своими руками необходимо уделить креплению электропривода к столбу.

Зачастую делают крепление на крошащийся кирпич либо на столб в полуразрушенном состоянии. В период проведения работ привод может отвалиться с куском кирпича или столба. Если столб находится в плачевном состоянии, то следует обварить его по кругу, установить усилители.

Что дальше?

Затем нужно провести разблокировку привода, т. е. перевести его в ручной порядок, и приварить кронштейны крепления к самим воротам.

Важно! Если применяются линейные электрические приводы, при приваривании к воротам кронштейнов должен оставаться минимум 1 см хода штока. Иными словами, при целиком открытых распашных воротах должен остаться хотя бы 1 см свободного хода.

После следует проверить ход створки и параллельность в движении приводов. Если выявился недочет, то его стоит сразу исправить.

Затем выставляются упоры на закрывание или открывание.

Следующим этапом в установке автоматики своими руками для распашных ворот является подключение двигателей (3 провода для систем 220 В и 2 – для 24 В соответственно).

Необходимо поставить нужные перемычки в зависимости от выбранной модели, подшить пульты и запустить систему. В том случае, если одна створка распашных ворот движется не в ту сторону, следует поменять провода на двигателе местами, и проблема устранится.

Использование электронного блока управления для распашных ворот даёт возможность точной настройки режимов работы привода и обеспечивает коммутацию с пультами дистанционного управления.

Далее, если появится необходимость, концевые выключатели регулируются в соответствие с инструкцией.

Если концевые выключатели и приводы не входят в ваши планы, то на плате следует выставить период функционирования створки и усилие закрывания и открывания. Крайне нежелательно применять максимальное усилие, т. к. это значительно сократит срок эксплуатации автоматики распашных ворот.

Лучше всего выставить минимальное рабочее, которое позволит воротам хорошо функционировать.

Далее своими руками устанавливаются сигнальная лампа и фотоэлементы, но это по желанию. Убедительная просьба – не устанавливать фотоэлементы до того момента, пока усилия, настройки и т. п. не будут целиком отрегулированы.

Частой проблемой для устанавливающих автоматику своими руками, является неопытность. Из-за отсутствия опыта большинство умудряется в схеме подключения сделать по несколько ошибок, вследствие которых автоматика затем отказывается функционировать. Потом определить причину очень затруднительно. Известы случая когда из-за нарушений правил монтажа сервисные центры производителя отказывают в обслуживании новой автоматики, которой вы так и не успели попользоваться.

Именно поэтому следует подключать все постепенно, т. к. только в данном случае возможно будет обнаружить допущенную ошибку и быстро устранить ее. Не следует наступать на грабли – лучше вооружитесь горьким опытом тех, кто уже на них наступал. 

Перед началом монтажа внимательно изучите инструкцию к приводу =!

Автоматика ворот подъездной дорожки

Оператор верхнего поворотного рычага:
верхний Операторы поворотной руки — самые распространенные открыватели ворот. Лучшее качество бренды известны последние 20 лет. Эти агрегаты имеют хэви-метал рама и большие, пропитанные маслом коробки передач. Эстетический недостаток Эти единицы заключаются в том, что рука прикрепляется к воротам около середины высота и хорошо видна. Устройства открывания ворот с поворотной рукояткой

относительно просты в установке.Несмотря на то что у большинства устройств есть дверца доступа к схемам, обычно вы необходимо отсоединить рычаг ворот от привода и вытащить снимите всю крышку для обслуживания механики агрегата. Там есть рычаг разблокировки, расположенный на руке, где он крепится к оператору, который отключает руку.

Приводы ворот

с верхней поворотной рукояткой доступны во множестве конфигураций; Двигатели от 115 В до 460 В переменного, 24 В постоянного, переменного или постоянного тока с солнечными батареями.Эти блоки доступны для одинарных ворот длиной до 20 футов. и весом 13 000 фунтов. Наиболее распространенные операторы рассчитаны на Ворота 600-800 фунтов

Оператор нижнего поворотного рычага:
Нижний Операторы с поворотной рукоятью держат руку внизу, что дает ворота имеют приятный вид, если смотреть снаружи на собственность.

Очень немногие компании производят агрегаты такого типа.Двери — это главное компания-производитель их.

Нижние открыватели поворотного рычага

отличаются легкодоступной механикой и электроника, просто откройте крышку и все станет доступно. В сцепление одно из лучших и простое в регулировке. Еще одна хорошая особенность это высокая скорость устройства, которое может открыть ворота примерно за 6 секунд — примерно вдвое меньше, чем почти все остальные типы операторов.Открыватель нижних распашных ворот DoorKing 6100 показан на изображениях выше.

Оператор линейного рычага или подъемного рычага:
Линейный Arm, также известный как Ram Arm Operators, очень популярен и является самый простой в установке тип операторов. Они прикрепляются непосредственно к пост и бывают мелкими и незаметными. Электроника размещена в отдельная панель управления.Эти операторы доступны в механическом исполнении. или гидравлические версии. Многие механические линейные операторы доступны для солнечной установки.

Механические открыватели линейного типа являются наиболее распространенными. Операция как домкрат в виде бампера, и используйте аналогичный «домкрат». Винт домкрата представляет собой длинный стержень с резьбой, который вращается и перемещает эквивалент гайки вверх и вниз по валу с прикрепленным шибером к нему.Механические открыватели гидроцилиндров большего размера могут справиться с воротами. до 14 футов в длину и весит 500 фунтов.

Хотя эти устройства не требуют механических упоров, они рекомендуются. Все механические линейные рычаги имеют небольшую играть в них. При использовании на одинарных воротах рекомендуется положительный стоп должен быть добавлен к сообщению или столбцу напротив оператора. Привод должен быть отрегулирован так, чтобы ворота остановились. на остановке с небольшим давлением.При использовании на двойном проборе ворот рекомендуется использовать регулируемые концевые упоры для обеспечения приятный вид там, где ворота встречаются в центре.

Гидравлические сошники линейного типа дороже и может обрабатывать большие ворота до 2200 фунтов и длиной 22 фута. Эти агрегаты работают так же, как любая гидравлическая система, использующая насос. резервуар и поршень. Гидравлические агрегаты не могут использовать концевые выключатели.Вместо этого они полагаются на таймеры для запуска двигателя в определенные периоды. времени. Когда заслонка полностью открыта или закрыта, насос работает в течение несколько дополнительных секунд.

Для гидравлических приводов требуются механические упоры. Они есть используется для позиционирования ворот как в открытом, так и в закрытом положении. Оператор усилие регулируется с помощью клапанов давления. Эти операторы очень безопасны благодаря возможности точно контролировать, сколько сила, которую оператор применяет к воротам.Они недоступны для солнечных установок благодаря гидравлическому насосу, работающему на 115 или 230 В переменного тока.


Под землей, под землей или в земле Оператор:
Ниже Операторы ворот класса, под землей или в земле используются на высоком уровне инсталляции, в которых важна эстетика. Обычно подземный Открывашки используются на двустворчатых воротах и ​​часто встречаются в компании. колонн.Эти приводы доступны в механическом или гидравлическом исполнении. версии.

Подземные гидравлические приводы предназначены для более тяжелых ворот. В основном, подземный оператор ограничен воротами длиной 10 футов. Вот почему почти все установки сошников в земле предназначены для разделения на две части. распашные ворота. Гидравлическая версия требует упоров, которые добавляются отдельно.

Часто оператор крепится к внутреннему каркасу колонн как деталь интегрированной системы.Все эти приводы имеют упорный подшипник. сборка с отключающим механизмом, позволяющим воротам оставаться на месте если узел привода необходимо снять для обслуживания.

At Gate Equipment мы создаем нестандартные скелеты, которые имеют следующие характеристики: операторы подъема, петли, шкаф управления заподлицо и освещение предустановлен. Это делает эту сложную установку возможной для удобный человек. Магазин скелетов

Оператор раздвижных ворот:
Вид Схема установки откатных ворот

Операторы откатных ворот чаще всего используются для коммерческих ворот системы автоматизации.Однако откатные ворота — отличный выбор. для автоматизации подъездных ворот жилых домов, когда на объекте есть ограничения. В общем, установка откатных ворот требует больше таланта и денег. получить право и должны предприниматься только мастерами своими руками с хорошими механическими навыками.

Устройство открывания раздвижных ворот — хороший выбор, когда ворота находятся на крутых склонах. и вы не можете или не хотите открывать ворота наружу. Иногда нужно контролировать очень широкий вход, где распашные ворота были бы непрактичными.Если у вашего подъездного пути много из стороны в сторону на склоне следует учитывать оператора, имеющего тормозную систему.

Открывалки доступны с питанием от сети переменного тока, от аккумулятора и от солнечной батареи. модели. Доступны коммерческие единицы, которые могут управлять воротами. длиной до 40 футов и весом несколько тысяч фунтов

Последовательная разборка SNARE и сборка комплекса GATE-16 – GOS-28, опосредованная различными действиями NSF, способствует слиянию мембран Гольджи | Журнал клеточной биологии

Характеристика NSF млекопитающих (G274E) и Drosophila NSF ( коматоза, ) мутантов выявили эволюционно консервативную активность NSF, отличную от зависимой от АТФазы разборки SNARE, которая является существенной для слияния мембран Гольджи.Анализ функции NSF млекопитающих во время бесклеточной сборки цистерн Гольджи из митотических фрагментов Гольджи показал, что NSF разбирает Гольджи SNAREs во время митотической фрагментации Гольджи. Последующая АТФаза-независимая активность NSF, ограниченная фазой повторной сборки, важна для слияния мембран. NSF / α-SNAP катализируют связывание GATE-16 с GOS-28, v-SNARE Гольджи, способом, который требует АТФ, но не гидролиза АТФ. GATE-16 важен для управляемой NSF повторной сборки Гольджи и препятствует связыванию GOS-28 с его родственным t-SNARE, синтаксином-5.Мы предполагаем, что это происходит в начале повторной сборки Гольджи для защиты v-SNARE и регулирования функции SNARE.

NSF принадлежит к АТФазам, связанным с разнообразной клеточной активностью (Patel and Latterich, 1998) (AAA) * семейству АТФаз, и катализирует множественные события слияния экзоцитозной / эндоцитарной мембран, наиболее вероятно на стадии предкрепления (Colombo et al., 1996; Mayer et al., 1996). NSF функционирует посредством взаимодействия с SNARE, интегральными мембранными белками, которые рекрутируют NSF на мембраны через SNAP (Söllner et al., 1993). NSF связывается с комплексами SNAP-SNARE, образуя частицу, которая оседает на 20S и разбирается при управляемом NSF гидролизе АТФ (Wilson et al., 1992; Söllner et al., 1993). Разборка SNARE происходит как следствие конформационного переключения между состояниями ATP / ADP гексамера NSF, который генерирует вращательную силу, которая передается через SNAP, может помочь раскрутить спиральный пучок SNARE (Hanson et al., 1997; Owen and Schiavo, 1999) .

Циклическая сборка и разборка SNARE необходимы для устойчивого функционирования SNARE во время слияния мембран (Whiteheart et al., 1994; Mayer et al., 1996). Унитарный v-SNARE на везикуле специфически взаимодействует с родственным ему комплексом t-SNARE на мембране-мишени, образуя комплекс trans-SNARE, что приводит к тесной ассоциации везикулы с ее мембраной-мишенью, называемой стыковкой (Pfeffer, 1999; McNew и др., 2000). Высвобождение энергии, вызванное образованием комплекса транс-SNARE, может напрямую способствовать слиянию (Chen et al., 1999; McNew et al., 2000) или служить временным сигналом для последующих эффекторов, которые индуцируют слияние (Ungermann et al., 1998; Peters et al., 2001). После слияния в слитых мембранах накапливаются высокостабильные комплексы цис-SNARE. АТФаза-зависимая SNARE-диссоциативная активность NSF делает возможным их повторное использование для будущих событий слияния (Mayer et al., 1996; Xu et al., 1998).

При слиянии вакуолей, NSF-катализируемая разборка SNARE тесно связана с переносом LMA1 от NSF к t-SNARE Vam3p (Xu et al., 1998). LMA1 представляет собой гетеродимер 2-го ингибитора тиоредоксина / протеиназы B, и предполагается, что он поддерживает Vam3p в активированной форме, способствующей будущим событиям спаривания транс-SNARE (Xu et al., 1998). Сходная активность предполагается для GATE-16, компонента механизма транспорта внутри Гольджи, который связывает NSF и GOS-28, Golgi v-SNARE (Sagiv et al., 2000). Таким образом, NSF не только разбирает SNARE, но также способствует связыванию факторов активации SNARE, таких как LMA1, которые поддерживают активность SNARE для будущих событий слияния.

Чтобы лучше определить роль NSF в слиянии мембран, мы сосредоточились на биохимическом анализе различных мутантов NSF и их активности в бесклеточной системе, которая имитирует митотическую фрагментацию / повторную сборку аппарата Гольджи млекопитающих (Rabouille et al., 1995а, б). Они включали мутант NSF млекопитающих, сконструированный таким образом, чтобы имитировать один из коматозных мутантов D. melanogaster (dNSF-1 comt ST17 [Pallanck et al., 1995]). У мух мутации в коматозе и вызывают прогрессирующее снижение высвобождения нейромедиаторов при повышении температуры с 25 до 37 ° C (Siddiqi and Benzer, 1976). Нейропаралич при рестриктивной температуре сопровождается накоплением синаптических пузырьков и собранных комплексов SNARE в синаптических нервных окончаниях (Kawasaki et al., 1998; Толар и Палланк, 1998). Однако биохимический анализ коматозных мутантов dNSF-1 все еще отсутствует. Анализ мутантов NSF ATPase (в частности, D1 G274E и D1 E329Q) показал, что NSF-управляемая повторная сборка Golgi может происходить без NSF-управляемого гидролиза ATP и поэтому не связана с разборкой SNARE (Müller et al., 1999).

Анализируя состояние SNAREs и потребность в NSF во время митотической фрагментации / повторной сборки аппарата Гольджи, мы теперь показываем, что NSF имеет две функционально и биохимически разделимые, последовательные функции.Первый соответствует зависимой от АТФазе разборке SNAREs и происходит во время митотической фрагментации Гольджи. Второй необходим во время слияния митотических фрагментов Гольджи (MGF) и происходит в отсутствие гидролиза АТФ. Функциональное и биохимическое сравнение исходного коматозного мутанта dNSF-1 ( comt ST17 ) Drosophila с его аналогом из млекопитающих предполагает, что АТФаза-независимая активность NSF может быть эволюционно консервативной.

Чтобы определить независимую от ATPase функцию, мы сосредоточились на взаимодействии NSF-GATE-16 (Sagiv et al., 2000). Теперь мы покажем, что GATE-16 является важным компонентом повторной сборки Гольджи, управляемой NSF. GATE-16 действует на конечной стадии слияния мембран, совпадающей с GOS-28. Кроме того, NSF / α-SNAP стимулируют рекрутирование GATE-16 в неспаренный GOS-28 способом, который требует АТФ, но не гидролиза АТФ. GATE-16 не позволяет GOS-28 связывать его родственный синтаксин-5 t-SNARE (Subramaniam et al., 1997). Таким образом, GATE-16 является протектором v-SNARE (Pfeffer, 1999), который может предотвращать сборку GOS-28 в непродуктивные комплексы cis-SNARE.

Повторная сборка

Golgi может катализироваться мутантами NSF (D1 E329Q, D2 D604Q и D1 G274E), дефектными по гидролизу АТФ (Müller et al., 1999). Это, по-видимому, противоречит данным других анализов слияния мембран, таких как транспорт внутри Гольджи (Whiteheart et al., 1994), слияние эндосома-эндосома (Colombo et al., 1996) и регулируемый экзоцитоз (Banerjee et al., 1996). Эти исследования предполагают обязательную роль гидролиза АТФ и разборки SNARE с помощью NSF. Для удовлетворения требований к нуклеотидам, необходимых для управляемой NSF повторной сборки Гольджи, проводили реакции либо с NSF (дикого типа [wt]), либо с NSF (G274E) в присутствии различных нуклеотидов аденина или аналогов нуклеотидов.

MGF обрабатывали NEM для инактивации эндогенного NSF и α-SNAP (Wattenberg et al., 1992). NEM был подавлен с помощью DTT, и повторная сборка по Гольджи была инициирована добавлением экзогенного NSF, α-SNAP, γ-SNAP и связывающего везикулы белка p115. Слияние мембран (цистернальный рост) контролировали с помощью количественной ЭМ (Rabouille et al., 1995a, b). Как NSF wt, так и мутантный (G274E) катализируют слияние мембран в присутствии АТФ, ATPγS (медленно гидролизуемый аналог АТФ), AMP-PNP и AMP-PCP (оба негидролизуемых аналогов АТФ). Напротив, в присутствии ADPβS или отсутствии аденинового нуклеотида происходила небольшая повторная сборка (рис.1 а). Слияние мембран также было отменено, когда АТФ-дегенерирующие системы, такие как глюкоза / гексокиназа или апираза, были добавлены для преобразования АТФ в АДФ или АМФ, соответственно (неопубликованные данные).

Титрование NSF в реакции повторной сборки в присутствии ATP или ATPγS показало, что как wt, так и мутантные белки имели сходные профили активности (рис. 1, b и c). Это предполагает, что NSF действует по общему механизму, способствуя слиянию мембран Гольджи в присутствии или в отсутствие гидролиза АТФ.

Могут ли NSF гидролизовать АТФγS, определяли путем мониторинга высвобождения [γ- 35 S] из [γ- 35 S] ATPγS по сравнению с высвобождением [γ- 32 P] из [γ- 32 P] АТФ при 25 ° C (фиг. 1 d). АТФазная активность NSF wt (6,5 ± 1,3 мкмоль P i на мг NSF в час; в [γ- 32 P] АТФ) снижалась в ~ 30 раз в присутствии [γ- 35 S] АТФγS.Более того, это снижение наблюдалось даже при добавлении в реакцию стимулирующего фактора α-SNAP. NSF (G274E) не обладал АТФазной активностью ни в одном из этих условий (рис. 1 d). Таким образом, маловероятно, что низкий уровень гидролиза ATPγS с помощью NSF wt необходим для NSF-управляемой повторной сборки по Гольджи, поскольку при ненасыщающих концентрациях NSF (wt и мутантных) слияние мембран происходит до ~ 60% в ATPγS (Fig. 1 c). Это открытие подтверждается тем фактом, что NSF (wt или мутантный) может индуцировать слияние мембран Гольджи в присутствии негидролизуемых аналогов АТФ AMP-PNP и AMP-PCP (рис.1 а). Вместе эти результаты означают, что гидролиз АТФ и, следовательно, разборка SNARE не требуется во время повторной сборки Гольджи, управляемой NSF, однако присутствие АТФ или аналога АТФ является важным.

Природа этой особой роли NSF в повторной сборке Гольджи подняла различные вопросы (Müller et al., 1999; Schwarz, 1999), например, сродни ли она активности NSF, которая индуцирует слияние липосом (Otter-Nilsson et al., 1999). Однако это маловероятно, поскольку активность NSF, необходимая для повторной сборки Golgi, является NEM чувствительной и требует α-SNAP (Müller et al., 1999), в отличие от активности слияния липосом NSF (Brügger et al., 2000). Мы предположили, что альтернативой этой крайней точке зрения было бы то, что NSF выполняет несколько функций во время слияния мембран и что обильный источник разобранных SNARE уже существует на MGF. Если так, то разборка SNARE, управляемая NSF, может потребоваться перед слиянием мембран, но это событие, которое временно и функционально отличается от АТФаз-независимой функции NSF во время слияния мембран.

Чтобы проверить эту гипотезу, олигомерное состояние SNARE Гольджи было исследовано на MGF и мембранах Гольджи печени крысы (RLG) с учетом того факта, что комплексы SNARE устойчивы к SDS при 37 ° C и могут быть визуализированы как высокомолекулярные комплексы с помощью иммуноблот (Otto et al., 1997; Shorter et al., 2002). Подобно нейронным SNARE (Müller et al., 1999), множественные SDS-устойчивые комплексы наблюдались при ~ 100 кД для синтаксина-5, rbet-1 и Ykt6 SNARE Гольджи на RLG (рис.1 д) (Шортер и др., 2002). Эти комплексы исчезали при кипячении мембран перед электрофорезом. Напротив, эти высокомолекулярные комплексы отсутствовали на MGF (рис. 1e). Это указывает на то, что комплексы SNARE предсуществуют на RLG и разбираются во время митотической фрагментации. Это также объясняет тот факт, что разборка SNARE не требуется во время слияния MGF. Важно, что эти данные подразумевают, что NSF необходим дважды во время цикла фрагментации / повторной сборки аппарата Гольджи, поскольку MGFs все еще нуждаются в NSF в независимой от АТФазы роли для реформирования цистерн.

Если NSF выполняет две функции при повторной сборке Гольджи, мы могли бы ожидать, что коматозный мутант NSF будет катализировать слияние, только если MGFs подверглись действию функционального wt NSF во время фазы фрагментации, чтобы создать пул разобранных SNAREs. Чтобы проверить эту гипотезу, RLG и митотический цитозоль обрабатывали отдельно NEM (для инактивации эндогенного NSF / α-SNAP), который затем гасили DTT перед смешиванием для митотической фрагментации.Эта обработка NEM не влияет на митотическую фрагментацию (Rabouille et al., 1995b). Обработанные NEM RLG и обработанный NEM митотический цитозоль смешивали и инкубировали с α-SNAP и NSF (wt или мутантным) для избирательного восстановления разборки SNARE. Затем реакции снова обрабатывали NEM, чтобы инактивировать добавленный NSF / α-SNAP, и позволяли продолжить митотическую фрагментацию. Затем MGF выделяли и повторно собирали в присутствии или в отсутствие дикого или мутантного NSF. В отсутствие добавленного NSF повторная сборка не происходила после любого предыдущего условия фрагментации (рис.2 а, условия 3, 6, 9 и 12). Таким образом, остаточная активность NSF от фазы митотической фрагментации не сохраняется в фазе повторной сборки после обработки NEM. Слияние, катализируемое NSF wt, независимо от того, были ли MGF генерированы ранее в отсутствие или в присутствии предварительной обработки NEM (рис. 2а, условия 1 и 4). Напротив, мутантный NSF только стимулировал слияние MGF, которые были созданы либо в отсутствие предварительной обработки NEM (т.е. в присутствии эндогенного NSF [Рис. 2a, условие 2]), либо генерировались в присутствии NEM, но обработаны wt NSF перед сваркой (рис.2 а, условие 8). Это означает, что MGFs реформируют цистерны только в том случае, если они подвергались воздействию NSF дикого типа на одной стадии анализа. Таким образом, SNARE-диссоциативная функция NSF необходима для слияния мембран, но может выполняться во время митотической фрагментации. Эти данные также подтверждают, что спаривание SNARE ингибируется в митотических условиях, что, вероятно, вносит вклад в митотическое ингибирование транспорта внутри Гольджи и ER-Гольджи, который индуцирует фрагментацию Гольджи (Warren, 1985). Это может быть связано с митотическим высвобождением p115 из мембран Гольджи и ингибированием событий связывания везикул, которые способствуют образованию нижестоящих транс-SNARE-комплексов (Nakamura et al., 1997; Шортер и др., 2002).

Чтобы подтвердить, что роль NSF во время фрагментации Гольджи заключается в генерации разобранных SNARE (рис. 2a, условия 2 и 8), MGF были приготовлены и обработаны NSF (wt или мутантным), как описано на рис. 2a. Затем мембраны солюбилизировали, и либо GOS-28, либо GS15 подвергали иммунопреципитации. Комплекс SNARE, включающий GOS-28, GS15 и синтаксин-5, был выделен из экстракта RLG (рис.2 б, дорожка 5) (Шортер и др., 2002). После инкубации мембран с митотическим цитозолем этот комплекс SNARE не обнаруживался (фиг. 2b, дорожка 1), но сохранялся при предварительной обработке NEM (фиг. 2b, дорожка 2). Это указывает на то, что эндогенный NSF, снабженный митотическим цитозолем, разбирает ранее существовавшие комплексы SNARE. Это подтверждается открытием, что добавление в реакции дикого NSF (рис. 2b, дорожка 3), но не мутантного NSF (рис. 2b, дорожка 4) восстанавливает разборку SNARE. Вместе эти данные означают, что комплексы SNARE на RLG разрушаются с помощью NSF дикого типа во время митотической фрагментации RLG и что разборка SNARE важна для цикла фрагментации / повторной сборки по Гольджи.Более того, эти результаты различают два независимых действия NSF, необходимых для повторной сборки по Гольджи, поскольку MGF, которые подвергаются воздействию NSF дикого типа перед повторной сборкой и, таким образом, содержат пул разобранных SNARE (рис. 2b, дорожки 1 и 3), по-прежнему требуют NSF (wt или мутантного ) для слияния и реформирования цистерн (рис. 2 а, условия 2 и 8).

Идентификация второй функции NSF во время слияния мембран в значительной степени основана на использовании мутанта NSF млекопитающих в коматозе . Чтобы выяснить, является ли этот коматозный -подобный мутант NSF биохимической фенокопией аллеля comt ST17 dNSF-1 из D. melanogaster , были охарактеризованы белки Drosophila NSF-1. Это помогло бы решить, является ли АТФаза-независимая активность эволюционно законсервированной активностью NSF. Таким образом, Drosophila NSF-1 wt и мутантные белки были экспрессированы в E. coli и очищены с использованием их NH 2 -концевых His 6 -тегов (рис.3 а, врезка). Оба белка были протестированы на их способность способствовать повторной сборке Гольджи при 25 и 37 ° C, допустимой и ограничительной температуре для нейрональной функции коматозных мух. dNSF-1 wt способствовал возобновлению роста цистерны при обеих температурах со средней активностью слияния ~ 40% по сравнению с его аналогом у млекопитающих (рис. 3 а). Снижение активности dNSF-1, вероятно, обусловлено снижением на ~ 50% по сравнению с NSF млекопитающих его способности связываться с комплексами SNAP-SNARE млекопитающих (неопубликованные данные).Напротив, мутантный dNSF-1 катализировал повторную сборку до уровней, наблюдаемых с dNSF-1 wt при 25 ° C, но был неактивным при 37 ° C. Таким образом, коматозный мутант dNSF-1 чувствителен к температуре для слияния мембран и, следовательно, функционально имитирует своего аналога у млекопитающих.

Структурный и биохимический анализ мутанта dNSF-1 выявил дополнительные сходства между мутантами дрозофилы и коматозной млекопитающих.Что касается мутанта млекопитающего (Müller et al., 1999), то мутант Drosophila (а) необратимо изменяет конформацию при 37 ° C (рис. 3, б), (б) не изменяет конформацию в присутствии различных адениновых нуклеотидов. (Рис. 3 c), (c) не имеет обнаруживаемой активности АТФазы в диапазоне температур от 20 до 40 ° C (хотя и dNSF-1 wt; неопубликованные данные), и (d) дефектен при разборке Drosophila SNAP– Комплексы SNARE (рис. 3, г). Вместе эти результаты предполагают, что мутант NSF млекопитающих и аутентичный коматозный мутант являются структурными и биохимическими фенокопиями.Более того, они указывают на то, что АТФаза-независимая активность NSF сохраняется в мутанте dNSF-1 и выявляют эволюционно консервативный аспект этой альтернативной функции NSF.

Чтобы изучить точную природу АТФазы-независимой роли NSF в повторной сборке Гольджи, мы провели поиск партнеров по связыванию NSF, участвующих в слиянии мембран Гольджи. GATE-16, цитозольный белок и белок периферической мембраны Гольджи, необходимый для транспорта внутри Гольджи, был идентифицирован в качестве кандидата, поскольку он связывает NSF и GOS-28 (Sagiv et al., 2000), Golgi v-SNARE, участвующий в NSF-управляемой повторной сборке Golgi (Shorter et al., 2002).

Если бы GATE-16 участвовал в независимой от АТФазе функции NSF, он также потребовался бы для управляемой NSF повторной сборки Гольджи. Эта возможность была проверена с использованием аффинно очищенной нейтрализующей антисыворотки, повышенной до GATE-16. Предварительная инкубация MGF с этими антителами ингибировала слияние мембран примерно на 90% (рис. 4 а). Это ингибирование было отменено предварительной адсорбцией антител с His 6 –GATE-16.Кроме того, титрование His 6 –GATE-16 в реакциях повторной сборки увеличивало цистернальный отрастание максимум на ~ 37% при 20 нг / мкл His 6 –GATE-16 (рис. 4 b).

Затем последовательность действия NSF, GATE-16 и GOS-28 во время повторной сборки по Гольджи была установлена ​​с использованием четко определенных ингибиторов в кинетическом анализе. Таким образом, реакции повторной сборки Гольджи прекращали в разные моменты времени путем фиксации (отрицательный контроль), обработки только буфером (положительный контроль) или различными ингибиторами, после чего реакции позволяли протекать в течение всего 1 часа.Прекращение реакции фиксацией показало, что возобновление роста цистерны протекает с приблизительно линейной кинетикой в ​​течение первых 45 мин (рис. 4 с). Добавление буфера в любой момент времени во время реакции не влияло на слияние мембран (рис. 4 с). Все протестированные ингибиторы практически полностью отменяли слияние при добавлении в начале инкубации. Инактивация NSF и α-SNAP путем добавления NEM (Wattenberg et al., 1992) ингибировала реакцию в течение первых 15 минут инкубации (рис.4 c) и могут быть спасены добавлением свежих NSF и α-SNAP, что позволяет предположить, что никакие дополнительные чувствительные к NEM факторы не были инактивированы (неопубликованные данные). Это ингибирование было намного сильнее через 5 минут, чем через 15 минут, что позволяет предположить, что NSF выполняет большую часть своей функции в течение 5-15 минут промежуточного периода. В более поздние моменты времени реакция была устойчивой к NEM, указывая на то, что NSF и α-SNAP требовались только на этой ранней стадии (рис. 4 c). Напротив, добавление антител против GOS-28 или против GATE-16 ингибировало возобновление роста цистерны на протяжении всей реакции, указывая на то, что оба белка необходимы на конечной стадии слияния (рис.4 в). Вместе это указывает на то, что независимая от АТФаза функция NSF происходит выше облигатных функций GATE-16 и GOS-28.

Какова роль GATE-16 в повторной сборке Гольджи, управляемой NSF? Одна возможность состоит в том, что он сохраняет диссоциированную форму GOS-28 в компетентном для слияния состоянии, возможно, подобно активации t-SNARE Vam3p с помощью LMA1 при слиянии вакуолей (Xu et al., 1998).Если это так, GATE-16 должен предпочтительно связывать непарный GOS-28. Таким образом, His 6 –GATE-16 был смешан с детергентным экстрактом RLG или MGF, источником парных и непарных SNARE, соответственно. Затем GOS-28 подвергали иммунопреципитации и с помощью иммуноблоттинга анализировали степень соосаждения синтаксина-5, rbet-1 и GATE-16. GOS-28 присутствовал в комплексе SNARE вместе с синтаксином-5 и rbet-1 на RLG, но не на MGF (рис. 5 a). Связывание GATE-16 с GOS-28 было в ~ 5 раз более эффективным при использовании MGF вместо RLG, что позволяет предположить, что только неспаренный GOS-28 может связывать GATE-16.

Затем мы проверили влияние GATE-16 на спаривание GOS-28-синтаксин-5 в анализах связывания чистого белка. His 6 -GOS-28 смешивали в эквимолярной концентрации с GST-синтаксином-5 в присутствии возрастающих количеств His 6 -GATE-16. GST-синтаксин-5 был получен с помощью гранул глутатиона, или His 6 -GOS-28 был иммунопреципитирован. GATE-16 был чрезвычайно мощным ингибитором связывания GOS-28-синтаксин-5, поскольку даже когда он присутствовал на эквимолярных уровнях с SNAREs, GATE-16 почти полностью ингибировал связывание GOS-28-синтаксин-5 (рис.5 б). Эти данные предполагают, что GOS-28 – синтаксин-5 и GOS-28 – GATE-16 образуют взаимоисключающие комплексы.

Основываясь на требованиях и кинетике функции NSF и GATE-16, возможно, что АТФаза-независимая функция NSF при повторной сборке Golgi заключается в усилении образования комплексов GATE-16-GOS-28. Для такой активности, чтобы точно отражать независимую от АТФазу роль NSF в повторной сборке по Гольджи, она должна быть чувствительной к NEM и чувствительной к температуре для мутанта NSF.

Эффект NSF / α-SNAP на связывание GOS-28 – GATE-16 был протестирован путем смешивания His 6 –GATE-16 с различными комбинациями экстракта MGF, α-SNAP и NSF (дикого или мутантного). GATE-16 подвергали иммунопреципитации, и степень соосаждения GOS-28, синтаксина-5, α-SNAP и NSF определяли с помощью иммуноблоттинга (фиг. 6 a). NSF wt соосаждался с GATE-16 при предварительной инкубации при 25 (фиг. 6а, дорожка 3) и 37 ° C (фиг. 6а, дорожка 5).Напротив, мутантный NSF был соосажден при предварительной инкубации при 25 ° C (фиг. 6a, дорожка 6), но не при предварительной инкубации при 37 ° C (рис. 6a, дорожка 8), наиболее вероятно, потому что мутант необратимо денатурируется при 37 ° C. ° C. Кроме того, GOS-28 связывался с GATE-16 (фиг. 6а, дорожка 1) и стимулировался примерно в 9 раз добавлением α-SNAP / NSFSNAP / NSF. NSF wt усиливал связывание GOS-28 при предварительной инкубации как при 25, так и при 37 ° C (фиг. 6а, дорожки 9 и 11). Напротив, мутантный NSF стимулировал связывание GOS-28 при предварительной инкубации при 25 ° C (рис. 6а, дорожка 12), но не при предварительной инкубации при 37 ° C (рис.6а, переулок 14). Стимуляция была чувствительной к NEM, что указывало на то, что для этой реакции требовался функциональный NSF (фиг. 6а, дорожки 10 и 13). Хотя он необходим для усиленного связывания GATE-16-GOS-28, α-SNAP не присутствует в иммунокомплексах GATE-16. Это предполагает, что α-SNAP запускает образование комплекса GATE-16-GOS-28, возможно, за счет рекрутирования NSF / GATE-16 на неспаренный GOS-28, что согласуется с наблюдаемым связыванием α-SNAP с неспаренным GOS-28 (Subramaniam et al. , 1997). Кроме того, синтаксин-5 не был соосажден, что позволяет предположить, что GOS-28 взаимодействует с GATE-16 только при диссоциации от синтаксина-5.

Для более точного определения этих взаимодействий были проведены анализы связывания с чистыми белками. Таким образом, биотинилированный His 6 –GATE-16 (bio – GATE-16) смешивали с His 6 –GOS-28 в эквимолярной концентрации в присутствии Mg-ATP и инкубировали с различными комбинациями α-SNAP и NSF. (wt или G274E), которые не обрабатывали, инкубировали при 37 ° C или инактивировали NEM. Затем био-GATE-16 извлекали с помощью мономерных авидиновых шариков, а связанные белки элюировали и фракционировали с помощью SDS-PAGE.Степень соосаждения His 6 –GOS-28, α-SNAP и NSF определяли путем окрашивания кумасси бриллиантовым синим. В отсутствие NSF и α-SNAP наблюдалось некоторое взаимодействие между bio – GATE-16 и His 6 –GOS-28 (рис. 6 b). Однако это взаимодействие стимулировалось примерно в 5 раз включением α-SNAP и NSF (wt или G274E) (рис. 6b). Ни α-SNAP, ни NSF сами по себе не усиливали взаимодействие, хотя NSF, но не α-SNAP, связывались с bio-GATE-16 (Fig. 6b). Опять же, стимуляция α-SNAP / NSF связывания GOS-28-GATE-16 отменялась инактивацией NSF (wt и G274E) с помощью NEM.Кроме того, wt NSF, но не мутантный NSF, стимулировал связывание GOS-28-GATE-16, если предварительно инкубировали при 37 ° C (рис. 6b).

Затем мы спросили, влияют ли GATE-16, α-SNAP и GOS-28 на АТФазную активность NSF (wt или мутантного). Таким образом, АТФазную активность NSF (дикого типа и мутантного) определяли путем измерения высвобождения [γ- 32 P] из [γ- 32 P] АТФ в присутствии различных комбинаций GATE-16, α- SNAP и GOS-28 при 25 ° C.NSF wt гидролизовал АТФ (5,4 ± 0,3 мкмоль P i на мг NSF в час), и эта активность была увеличена в ~ 1,5 раза при добавлении GATE-16 и в ~ 3,3 раза за счет α-SNAP (рис. 6 c) . Добавление GOS-28 несколько снижало стимулируемую α-SNAP активность NSF wt; однако это снижение было отменено добавлением GATE-16 (рис. 6 c). Напротив, NSF (G274E) не обладал АТФазной активностью и не мог быть спасен ни одной комбинацией α-SNAP, GATE-16 и GOS-28 (рис. 6c; неопубликованные данные).

В целом, эти данные убедительно свидетельствуют о том, что образование комплекса GATE-16-GOS-28, стимулированное NSF / α-SNAP, представляет собой часть АТФазно-независимой функции NSF, необходимой для повторной сборки по Гольджи, поскольку она осуществляется коматозной АТФазой . NSF-мутант, чувствительный к NEM и температуре.

Затем была протестирована нуклеотидная зависимость стимуляции NSF / α-SNAP связывания GOS-28 – GATE-16. Таким образом, bio – GATE-16 инкубировали с экстрактом детергента MGF и α-SNAP / NSF (wt или мутантным) в присутствии Mg-ATP, Mg-ATPγS или Mg-ADPβS. Затем bio-GATE-16 был извлечен с помощью мономерных авидиновых шариков, и степень соосаждения GOS-28 и NSF была определена с помощью иммуноблоттинга. В отсутствие био-GATE-16 ни GOS-28, ни NSF не были извлечены (рис.7 а). После добавления bio-GATE-16 низкие уровни GOS-28 были получены в присутствии Mg-ATP и Mg-ATPγS, но не в присутствии Mg-ADPβS (рис. 7 a). Добавление α-SNAP / NSF (wt или мутантного) вызывало соосаждение NSF с GATE-16, и количество извлеченного GOS-28 увеличивалось примерно в 10 раз в присутствии Mg-ATP и Mg-ATPγS (рис. 7 a). . Однако эта стимуляция значительно снижалась в присутствии Mg-ADPβS, и NSF больше не соосаждался (фиг. 7a). Это предполагает, что подобно NSF-управляемой повторной сборке Гольджи, NSF / α-SNAP стимуляция связывания GOS-28-GATE-16 требует АТФ, но не гидролиза АТФ и не происходит в присутствии АДФ.

Эти результаты были подтверждены в анализе связывания чистого белка (рис. 7, b и c). Таким образом, α-SNAP / NSF (wt [Рис. 7b] или мутантный [Рис. 7c]) стимулировал образование комплекса GOS-28-GATE-16 в присутствии Mg-ATP и в присутствии медленно гидролизуемый Mg-ATPγS и негидролизуемый Mg-AMP-PNP и Mg-AMP-PCP (рис. 7, b и c). Напротив, в отсутствие нуклеотида или в присутствии Mg-ADP или Mg-ADPβS комплекс образовывался в ~ 5 раз меньше (рис.7, б и в). Т.о., нуклеотидная зависимость NSF-стимулированного образования комплекса GOS-28-GATE-16 идентична таковой для NSF-управляемого слияния мембран Гольджи.

Бесклеточный анализ митотической фрагментации / повторной сборки по Гольджи предоставил мощный инструмент для анализа молекулярных событий, окружающих слияние мембран. Детальное изучение этого процесса выявило роль NSF в событии слияния (Rabouille et al., 1995a), но позже было обнаружено, что она отличается от общепринятой роли NSF в разборке SNARE (Müller et al., 1999). Слияние мембран поддерживалось мутантами NSF, дефектными по гидролизу АТФ (Müller et al., 1999) и в присутствии медленно гидролизуемого аналога АТФ ATPγS или негидролизуемых аналогов АТФ AMP-PNP и AMP-PCP.

Здесь мы продемонстрировали, что NSF обладает по крайней мере двумя различными функциональными и биохимическими активностями, которые могут быть изучены изолированно в контексте цикла митотического наследования Гольджи.Первая функция NSF — это классическая АТФаза-зависимая разборка комплексов SNARE, которые уже существуют на мембранах Гольджи. Это выполняется во время митотической фрагментации Гольджи и приводит к генерации MGF, содержащих пул диссоциированных SNARE. Вторая функция NSF важна для слияния MGFs, не зависит от АТФазы, требует α-SNAP и включает образование комплекса GATE-16-GOS-28.

GATE-16 является одним из трех ортологов дрожжевого белка Apg8p / Aut7p у млекопитающих и участвует в транспорте внутри Гольджи (Sagiv et al., 2000). У дрожжей Apg8p необходим для аутофагии, пути нацеливания от цитоплазмы к вакуоли (Ichimura et al., 2000; Kirisako et al., 2000) и, возможно, транспорта ER в Golgi (Legesse-Miller et al., 2000). Теперь мы показываем, что GATE-16 функционирует в сборке цистерн Гольджи из MGFs и действует на терминальной фазе слияния мембран, совпадающей с GOS-28. GATE-16 связывается с NSF и GOS-28, а образование комплекса GATE-16-GOS-28 стимулируется α-SNAP / NSF. Образование комплекса GATE-16-GOS-28 на MGFs также опосредуется коматозным мутантом NSF, что указывает на то, что гидролиз АТФ не требуется.Взаимодействие между коматозным мутантом NSF и GATE-16 и стимуляция связывания GATE-16-GOS-28 чувствительны к температуре. Преинкубация коматозного NSF мутанта при 37 ° C отменяет его способность стимулировать связывание GOS-28-GATE-16, скорее всего потому, что мутант NSF денатурирует при этой температуре (Müller et al., 1999). Кроме того, нуклеотидная зависимость образования комплекса GOS-28-GATE-16, стимулированного NSF / α-SNAP, была идентична зависимой от NSF-управляемой повторной сборки Гольджи в том, что требовался гидролиз АТФ, но не АТФ, а АДФ и отсутствие нуклеотида были неэффективными. .

Эти находки подтверждают, что NSF-зависимый катализ связывания GATE-16-GOS-28 представляет собой часть ATPase-независимой стадии, необходимой для слияния мембран Гольджи (Müller et al., 1999). Каталитическая роль NSF может включать сворачивание GATE-16, возможно, для высвобождения связывающего домена GOS-28 в GATE-16. В качестве альтернативы, NSF / α-SNAP может позволить правильное сворачивание GOS-28, чтобы позволить GATE-16 связываться. В соответствии с этим NSF / α-SNAP связывается с неспаренным GOS-28 и может вызывать конформационные изменения в Q-SNARE изолированно (Hanson et al., 1995; Subramaniam et al., 1997).

Это оставляет открытой точную роль GATE-16 в повторной сборке Гольджи. GATE-16 предпочтительно связывается с неспаренной формой GOS-28 и препятствует связыванию GOS-28 с его родственным синтаксином-5 t-SNARE в растворе детергента. Эти эффекты напоминают ингибирование связывания синтаксин-VAMP с помощью Munc18 (Pevsner et al., 1994) и связывания Sed5p / Bet1p с помощью Sly1p (Lupashin and Waters, 1997), предполагая, что GATE-16 может быть протектором v-SNARE. (Пфеффер, 1999).Таким образом, GATE-16 может препятствовать сборке GOS-28 в непродуктивные комплексы cis-SNARE. Напротив, GATE-16 может способствовать регулируемой сборке комплексов trans-SNARE в подходящие моменты времени. Возможно, что GATE-16 по аналогии с LMA1 (Xu et al., 1998) поддерживает лабильный GOS-28 в компетентном к слиянию состоянии. Непарный GOS-28 может принимать субоптимальную конформацию для регулируемой сборки транс-SNARE комплекса, и это может быть исправлено с помощью GATE-16.

GATE-16 требуется на конечной стадии слияния мембран, совпадающей с GOS-28.Предположительно, GATE-16 д. Быть вытеснен из GOS-28, чтобы произошло образование комплекса trans-SNARE, которое может потребовать Rab GTPase, как и при вытеснении Sly1p из синтаксина-5 (Lupashin and Waters, 1997). Munc18 также участвует в терминальной фазе экзоцитоза, совпадающей с функцией SNARE, и может способствовать открытию пор слияния (Fisher et al., 2001).

Недавние сообщения показали, что NSF также взаимодействует со многими другими белками, участвующими в динамике мембраны, такими как эффекторы Rab (McBride et al., 1999), рецепторы AMPA (Hanley et al., 2002) и β-аррестин (McDonald et al., 1999). NSF перестраивает конформационное или олигомерное состояние этих белков, подразумевая, что он может иметь более широкую шапероноподобную роль в клетках.

Принимая во внимание наши находки, мы предполагаем, что NSF может выполнять двойную клеточную роль во время слияния мембран как фолдаза и разворачивание. Развертывание, такое как разборка SNARE, будет происходить зависимым от АТФазы способом, тогда как события сворачивания, такие как образование комплекса GATE-16-GOS-28, будут происходить независимым от АТФаз способом, возможно, подобно сворачиванию белка GroEL (Makino и другие., 1993; Рай и др., 1997). Интересно, что другие белки AAA также обладают сходной шапероноподобной активностью. Архебактериальный гомолог p97 / CDC48, названный VAT, проявляет дифференциальную шаперонную активность в зависимости от скорости гидролиза его АТФ. Подобно находкам с NSF, VAT ускоряет разворачивание тестового субстрата в его состоянии с высокой АТФазной активностью, тогда как рефолдинг ускоряется в состоянии с низкой активностью (Golbik et al., 1999). Точно так же активность АТФазы p97 опосредует разворачивание полипептидных субстратов, когда они перемещаются из просвета ER в цитозоль для деградации.Когда активность АТФазы p97 ингибируется, субстрат больше не разворачивается и остается прикрепленным к мембране ER (Ye et al., 2001). В более широком смысле, возможно, что коматозный мутант NSF обеспечивает фолдазную активность (независимую от АТФазы), но является дефектной с точки зрения активности разворачивания (зависит от АТФазы).

Наш анализ исходного коматозного мутанта NSF выявил его функциональное и структурное сходство с термочувствительным аналогом NSF у млекопитающих.Коматозный мутант dNSF-1 не обладает АТФазной и SNARE-диссоциативной активностью, тем не менее, он способствует слиянию мембран при 25 ° C. При ограничительной температуре 37 ° C мутант необратимо денатурируется. Это согласуется с необратимой транслокацией коматозного белка dNSF-1 из цитозоля в нерастворимую фракцию Triton X-100 в коматозных мухах при 37 ° C (Mohtashami et al., 2001). Это подтверждает идею о том, что новый биосинтез NSF необходим коматозным мухам для восстановления при 25 ° C, а не указывает на то, на какой стадии во время слияния мембран задействован NSF (Morgan, 1996).

В целом, наши находки предполагают, что АТФаза-независимая активность NSF является эволюционно консервативным аспектом функции NSF, и вызывают новые соображения. Учитывая важность разборки SNARE, как коматозные мухи выживают при 25 ° C, учитывая, что мутант коматозный dNSF-1 сильно скомпрометирован в его АТФазной и SNARE-диссоциативной активности? Это любопытно, поскольку белок dNSF-1 wt не обнаруживает активности АТФазы in vitro (неопубликованные данные), но способен разбирать SNARE.Одна возможность состоит в том, что другие белки компенсируют дефицит dNSF-1 у коматозных мух. Одним из кандидатов является второй ген NSF из D. melanogaster , dNSF-2. Несмотря на функциональное сходство обеих изоформ dNSF, исследования экспрессии на мухах подтвердили, что оба гена обладают взаимоисключающим временным и пространственным паттерном экспрессии (Golby et al., 2001). Однако неизвестно, изменен ли паттерн экспрессии dNSF-2 у коматозных и мух. Наконец, учитывая, что dNSF-1 обладает двумя консервативными активностями, ясно, что дальнейший анализ мутантов NSF-АТФазы в контексте мух может помочь различить относительный вклад активности NSF-фолдазы и развертывания в слияние мембран.

Следующие mAb использовали против GOS-28, GS15, Bet1p (Transduction Labs), α-SNAP (ExAlpha), dsyntaxin-1A (S. Benzer, California Institute of Technology, Pasadena, CA), RGS-His (QIAGEN) и тег Myc (9E10). Кроличьи поликлональные антитела были против синтаксина-5, NSF (A. Price, Йельская медицинская школа), GOS-28 (T. Söllner, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, New York, NY), Ykt6p (W. Hong, Institute of Molecular и клеточная биология, Сингапур) и GATE-16 (Z.Элазар, Институт науки Вейцмана).

Реакции повторной сборки проводили, как описано в Müller et al. (1999). В некоторых реакциях АТФ (2 мМ) был исключен или заменен на ATPγS (2 мМ), AMP-PNP (2 мМ), AMP-PCP (2 мМ) или ADPβS (2 мМ). В других случаях система регенерации АТФ была заменена системой истощения АТФ, включающей гексокиназу (5 Ед / мл; Sigma-Aldrich) и глюкозу (10 мМ) или апиразу (5 Ед / мл; Sigma-Aldrich).В некоторых реакциях RLG и митотический цитозоль предварительно обрабатывали NEM (2,5 мМ) в течение 15 минут на льду, и NEM гасили DTT (5 мМ) в течение 15 минут на льду перед перемешиванием для митотической фрагментации. Затем к реакциям фрагментации добавляли α-SNAP (0,7 мкМ) и либо wt, либо G274E NSF (1,3 мкМ) и инкубировали при 25 ° C в течение 10 мин. Затем NSF / α-SNAP инактивировали NEM, и реакция продолжалась при 37 ° C в течение 20 минут. Затем извлеченные MGF либо повторно собирали, либо солюбилизировали для иммунопреципитации GOS-28 или GS15 (см. Ниже).В реакции повторной сборки добавляли His 6 –GATE-16 (0–3,1 мкМ). Также добавляли 3 мкл сыворотки против GATE-16 или 3 мкл сыворотки против GATE-16, которые обрабатывали 3 мкг GATE-16 в течение 15 минут на льду. При кинетическом анализе реакции обрабатывали NEM (2,5 мМ в течение 5 минут на льду и 5 мМ DTT в течение 5 минут на льду), сывороткой против GATE-16 (3 мкл) или сывороткой против GOS-28 (3 мкл). в назначенное время (0, 5, 15, 23, 30, 38, 45 и 60 мин) и инкубировали в течение 1 часа. В это время другие реакции обрабатывали буфером или прекращали фиксацией.Все реакции были остановлены фиксацией 2% глутаровым альдегидом и обработаны для ЭМ, и была определена степень цистернального отрастания (Nakamura et al., 1997).

RLG или MGF (40 мкг) инкубировали в буфере для образцов SDS (31,25 мМ Tris HCl, pH 6,8, 1% SDS, 5% сахароза, 2,5% β-меркаптоэтанол) при 37 или 100 ° C в течение 7 минут и обрабатывали для иммуноблот. Головы мух гомогенизировали в 20 мМ Hepes-KOH pH 7.4, 0,2 М сахарозы, 2,5 мМ NEM, 0,5 мМ PMSF, 2 мМ бензамидина, 10 мкг / мл лейпептина и постнуклеарный супернатант (PNS) получали центрифугированием при 1000 g в течение 10 мин. PNS центрифугировали при 12000 g в течение 10 минут для выделения легких мембран и смешивали с 2,5 мМ NEM в течение 20 минут с последующим 10 мМ DTT в течение 20 минут. Этот супернатант (40 мкг) инкубировали с 3 мкг dNSF-1 (дикого или мутантного) и 3 мкг dSNAP в 20 мМ Hepes-KOH, pH 7,8, 100 мМ KCl, 2 мМ DTT, 2 мМ EDTA, 0,5 мМ PMSF, 2. мМ бензамидин, 10 мкг / мл лейпептина, 0.5 мМ АТФ, 8 мМ MgCl 2 и система регенерации АТФ в течение 40 мин при 25 ° C. В некоторых реакциях NSF был предварительно инактивирован NEM. Затем образцы смешивали с SDS-буфером для образцов при 23 или 100 ° C в течение 10 минут и обрабатывали для иммуноблоттинга.

His 6 –GOS-28 (75 нМ) инкубировали в течение 1 ч при 4 ° C с 0–3,750 нМ His 6 –GATE-16 и 75 нМ GST – синтаксин-5 в связывающем буфере (20 мМ Hepes -КОН, pH 7.3, 150 мМ KCl, 2 мМ MgCl 2 , 30 мМ имидазол, 5% глицерин, 0,5% Triton X-100, 0,1 мМ DTT, 0,5 мг / мл STI). Только His 6 –GOS-28 или His 6 –GOS-28 плюс 3750 нМ His 6 –GATE-16 служили в качестве контроля. GST-синтаксин-5 получали инкубацией с 5 мкл глутатион-сефарозы в течение 30 мин при 4 ° C. Альтернативно, His 6 -GOS-28 иммунопреципитировали с 10 мкл гранул анти-GOS-28 в течение 30 мин при 4 ° C. В этом случае только GST-синтаксин-5 или GST-синтаксин-5 плюс 3,750 нМ His 6 -GATE-16 служили в качестве контроля.Промытые шарики элюировали буфером для образцов SDS-PAGE. Элюаты обрабатывали для иммуноблоттинга.

RLG или MGF ресуспендировали при 0,2 мг / мл в буфере Triton X-100 (20 мМ Hepes-KOH, pH 7,4, 200 мМ KCl, 1% (вес / объем) Triton X-100, 1 мМ DTT, 1 мМ пепстатин. , 10 мкг / мл лейпептина) и инкубировали 30 мин при 4 ° C при перемешивании. Экстракты осветляли центрифугированием при 20 000 г в течение 30 мин при 4 ° C.

Экстракты

(200 мкл) инкубировали в течение 1 ч с антителами против GOS-28 или антителами против GS15, связанными с Affi-Gel 10 (BioRad Laboratories, Inc.). Промытые шарики элюировали буфером для образцов SDS-PAGE и обрабатывали для иммуноблоттинга. В некоторых экспериментах в экстракт (200 мкл) добавляли 1 мМ АТФ, 5 мМ MgCl 2 и 1 мкг His 6 –GATE-16, и реакции инкубировали с гранулами анти-GOS-28 в течение 16 часов. при 4 ° С к иммуноизолирующим комплексам, содержащим ГОС-28.

В другие реакции (200 мкл) добавляли 1 мМ АТФ, 5 мМ MgCl 2 и 0,3 мкМ His 6 –GATE-16 и инкубировали в течение 1 ч при 4 ° C в присутствии или в отсутствие α- Только SNAP (0,1 мкМ), только NSF (wt или G274E; 0,03 мкМ) или α-SNAP и NSF (wt или G274E). Затем добавляли антитела против GATE-16, ковалентно связанные с протеином А-сефарозой (Sagiv et al., 2000) (20 мкл), и инкубировали в течение 4 ч при 4 ° C.Промытые шарики элюировали буфером для образцов SDS-PAGE. Элюаты обрабатывали для иммуноблоттинга.

В детергентный экстракт

MGF (0,2 мг / мл) добавляли 1 мМ аденинового нуклеотида (АТФ, ATPγS или ADPβS), 5 мМ MgCl 2 и 0,3 мкМ bio – GATE-16 и инкубировали в течение 1 часа при 4 ° C. в присутствии или в отсутствие α-SNAP (0,1 мкМ) и NSF (wt или G274E; 0,03 мкМ). Гранулы мономерного авидина (10 мкл; Pierce Chemical Co.) и инкубировали 30 мин при 4 ° C. Промытые шарики элюировали 100 мкл буфера Triton X-100 плюс 2 мМ биотина. Элюированные белки осаждали 12% (мас. / Об.) Трихлоруксусной кислотой. Осажденные белки фракционировали с помощью SDS-PAGE и обрабатывали для иммуноблоттинга.

Другие реакции связывания (200 мкл) проводили с использованием чистых белков в буфере Triton X-100 плюс 5 мМ MgCl 2 и 2 мМ АТФ.bio – GATE-16 (0,5 мкМ) инкубировали с His 6 –GOS-28 (0,5 мкМ) в присутствии или в отсутствие α-SNAP (0,1 мкМ) и NSF (wt или G274E; 0,03 мкМ) в течение 1 ч. на льду. В некоторых реакциях адениновый нуклеотид был опущен или заменен 2 мМ ATPγS, AMP-PNP, AMP-PCP, ADP или ADPβS. В других случаях bio-GATE-16 был иммобилизован на мономерных шариках авидина и инкубирован с His 6 -GOS-28 (0,5 мкМ), α-SNAP (0,1 мкМ) и NSF (wt или G274E; 5 нМ) в присутствие 2 мМ АТФ или 2 мМ AMP-PCP в течение 2 мин – 2 ч на льду.bio-GATE-16 был извлечен, и связанные белки были элюированы и осаждены, как описано выше. Осажденные белки фракционировали с помощью SDS-PAGE и окрашивали кумасси бриллиантовым синим.

Комплект для правой регулируемой калитки, круглый

Комплект для правой регулируемой калитки, круглый | Пожизненный забор

Магазин не будет работать корректно, если куки отключены.

Похоже, в вашем браузере отключен JavaScript. Для наилучшего взаимодействия с нашим сайтом обязательно включите Javascript в своем браузере.

Fit-Right

Функции
  • ИНДИВИДУАЛЬНОЕ РЕШЕНИЕ: Комплект регулируемых проходных ворот с рамой Fit-Right ™ подходит для проемов шириной от 24 до 72 дюймов, идеально подходит для случаев, когда вам нужно индивидуальное решение для проема ворот особого размера.
  • ПОЛНЫЙ КОМПЛЕКТ ВОРОТ: Включает все необходимое для создания прохода через ворота.Стальная рама ворот, звено канала с порошковым покрытием, запираемая защелка, петли ворот, стальные стяжки (стойки и петли в комплект не входят)
  • ПРОХОДНЫЕ ДВОЙНЫЕ ВОРОТА: Приобретите 2 комплекта и комплект UL301 Drop Rod для создания двойных ворот шириной до 12 футов
  • Доступны модели 48, 60 и 72 дюйма

Fit-Right Инструкция по сборке

Пожизненная ограниченная гарантия на ограждение

Часто задаваемые вопросы

ПРОСТОТА УСТАНОВКИ

Комплект ворот для звеньев цепи Adjust-A-Gate устанавливается на месте, чтобы каждый раз идеально подходить к открытию ворот.

С черным порошковым покрытием

ТЯГА ЦЕПИ ANTI-SAG

Этот комплект фурнитуры для ворот имеет запатентованную систему стропильных тросов, которая предохраняет ваши ворота от провисания или волочения.

  • Стенограмма видео

    Захватывающий новый продукт под названием «Ворота Fit Right в коробке».Теперь, когда вы строите заборные ворота, очень важно, чтобы они точно подходили, иначе ваши ворота не будут функционировать или защелкнуться должным образом. Если у вас нет возможности, правильно расставьте столбы из-за подземных препятствий. Что ж, если это так, то сборка Fit Right для вас. Все, что вам нужно, прямо здесь, в коробке: стальной каркас, проволока и вся ваша фурнитура. Теперь важно знать, что сборка Fit Right рассчитана на отверстие в 72 дюйма. Также важно знать, как правильно его измерить.Таким образом, мы измеряем расстояние от внутренних столбов забора до внутренних столбов забора. У меня 63 с половиной дюйма, это означает, что мне понадобятся мягкие восемь с половиной дюймов, чтобы он подошел должным образом. Хорошо. Так что я пошел дальше и отметил свои восемь с половиной дюймов как на верхней, так и на нижней распорке. Теперь я возьму ножовку и распилию те восемь с половиной дюймов.

    Теперь мы собираемся собрать вертикальную сторону защелки и вертикальную сторону петель для верхней и нижней распорных планок. На каждый угол по четыре установочных винта.Теперь давайте установим диагональный траст. Теперь давайте наложим сетку из звеньев рабицы. Вот то, что вы, вероятно, раньше не видели. Мы собираемся снять лишний забор из цепных звеньев. Следующий шаг действительно прост. Все, что мы делаем, это вставляем штанги затвора и прикрепляем их к раме. Привяжем верх цепи к верхней направляющей, а нижнюю цепь к нижней направляющей. И ворота завершены. Что, мы все закончили.

    Общее время сборки менее одного часа. Теперь не забудьте поговорить со специалистом домашнего центра обо всех вариантах регулируемых ворот, доступных из звеньев цепи, дерева, винила и композита.
    Ну, на этом пока все. Помните, что они говорят? Хороший забор — хороший сосед, до следующего раза.

Обзор продукта

Всегда идеального размера. Даже если этих внутренних отверстий нет.

Неравномерно расположенные внутренние проемы — худший кошмар для установщика ворот, но вот мечта подрядчика сбылась: профессиональная система ворот Fit-Right. Благодаря моделям высотой 4, 5 и 6 футов, которые расширяются от 24 до 72 дюймов в ширину, впервые можно быстро и легко построить ворота с жесткими допусками на месте.Даже если ваши почтовые ямы смещены или не идеальной ширины, это больше не проблема. Просто раздвиньте верхнюю и нижнюю направляющие по размеру и закрепите прилагаемым винтом, прикрепите звено цепи и обрезку, затем установите. Как и любой из наших продуктов, ходовые ворота Fit-Right имеют прочную конструкцию, исключающую любые потенциальные проблемы с провисанием или перетаскиванием. Проще говоря, они являются окончательным ответом для подрядчиков, занимающихся фехтованием, заинтересованных в повышении эффективности бригады и значительном сокращении количества бесполезного материала, висящего вокруг кладбища на кладбище.Каждый комплект включает телескопическую раму, петли и защелку, звено цепи, фурнитуру и комплект анкерного кабеля.

Основные характеристики комплекта каркаса ворот включают:

  • Построен на месте, чтобы идеально вписаться в проем ваших ворот — Совместимость с сетчатым ограждением
  • Качество подрядчика, удобство для самостоятельной работы — Включены подробные, простые для понимания иллюстрированные инструкции
Это идеальный комплект для сборки ворот как для домовладельцев, так и для подрядчиков.Установлено более ОДНОГО миллиона по всему миру. Просто лучшая доступная рамка для ворот.

Ecklund Drive Thru Gate — villagemfg.com

Лучшие ворота, которые у вас будут! — всплывает от вашего автомобиль и не касается его стороны, затем закрывается автоматически позади вас.

Г-н Эклунд изобрел эти ворота как ответ на отнимающие много времени и потенциально опасная рутинная работа по открытию, просмотру и закрытию ворота.После трех лет интенсивного использования на 300 ком- / теленок, фидер, чтобы закончить работу, он стал достоянием общественности. Эти ворота успешно используется в широком спектре приложений, таких как небольшие фермы для коров / телят, молочные фермы, крупные откормочные площадки, общественные пастбища, гравийные карьеры и аренда нефти.
Функции:

  • «Выскакивает» открывается, быстро закрывается и не касается сторона транспортного средства
  • Регулируемая длина — от 10 футов до 16 1/2 футов
  • Простота установки — крепится к стандартной стойке забора (не входит в комплект)
  • Требуется некоторая сборка (включая приварку рычага — необходимо отгружать двумя частями)
  • Установочный / сборочный DVD в комплекте

Ecklund Drive Thru Gate состоит из шести основных компонентов. как показано на диаграмме ниже.Эта комбинация функций делает ворота простыми, удобными в использовании, эффективными и привлекательный — разработан, чтобы дать много сезонов надежного использовать.


  1. Запатентованный механизм сброса давления позволяет ворота открываются быстрее, чем вы в них врезаетесь
  2. Втулка амортизирующая резиновая электропроводящая обладает амортизирующим эффектом, сохраняя при этом полностью электрифицированные ворота
  3. Удлинитель из электропроводящего стекловолокна можно отрегулировать, чтобы придать воротам общую длину от 10 футов до 1 1/2 футов, просто отрегулировав наконечник внутрь или наружу с помощью плоскогубцев.Кроме того, он очень гибкий и прочный
  4. Наконечник Forever Flex из мягкого ПВХ-пластика к стержню из стеклопластика — пальцами, которые созданы, чтобы вытолкнуть себя из щелей и препятствия при контакте
  5. Запатентованный «демпфер порывов ветра» ЗАПОРЫВАЕТ ворота быстро закрываться после проезда автомобиля и держать ворота от раскачивания при сильном ветре
  6. Ворота утеплены от столба с помощью изолятор обратно и легко устанавливается с помощью двух поставляются стопорные болты и специальные изолирующие втулки — также прилагаются полезные советы и подсказки по воротам и электрическое ограждение от Эклунда более 30 лет стаж работы в электрическом ограждении

SL-100 Привод откатных ворот переменного тока

SL-100 Привод откатных ворот переменного тока

Созданный как самый прочный и долговечный привод ворот переменного тока в своем классе, SL-100AC наверняка удовлетворит потребности большинства жилых и коммерческих ворот.SL-100AC устанавливает новый стандарт в приводах откатных ворот, может перемещать ворота весом до 1000 фунтов. и 37 футов шириной. Как и в случае с нашим DC Slider 100, мы предлагаем опциональную педаль экстренного отпускания.

Приводы

переменного тока поставляются с самой простой и надежной панелью управления в отрасли, которая имеет обратную совместимость. Мощный и надежный двигатель, прошедший полевые испытания более 20 лет.

Для получения дополнительной информации свяжитесь с нами или вашим местным дистрибьютором.


Загрузить брошюру

Загрузить руководство

Загрузить чертежи выброса

SL-100 AC Slider Технические характеристики

Загрузить брошюру Загрузить руководство
UL 325 2018
Гарантия Полные 7 лет для жилых помещений, 5 лет для коммерческих целей
Двигатель ½ HP
Рабочий цикл Непрерывный
Опции питания 120 В переменного тока
Передаточное число коробки передач 10: 1
Крышка Отформованная вращением — неразрушимая
Размеры W: 12 дюймов — L: 17.5 дюймов — В: 23,5 дюйма
Максимальная длина ворот 37 футов
Максимальный вес ворот 1000 фунтов
Скорость движения ворот 12 дюймов в секунду
Вес оператора 100 фунтов
Опции аварийной разблокировки Может открываться в случае сбоя питания
Резервная батарея Н / Д

SL-100 Гарантия на привод откатных ворот переменного тока

ОГРАНИЧЕННАЯ ГАРАНТИЯ ИЗГОТОВИТЕЛЯ

Поручитель гарантирует всех операторов ворот SL-100, SL-150, OH-200, SW300 и SW350.ALL-O-MATIC INC дает гарантию на свои открыватели ворот сроком на пять (5) лет в коммерческих установках и в течение семи (7) лет при установке в жилых помещениях на отсутствие дефектов схем, двигателя, коробки передач и изготовления. . Гарантия распространяется на первоначального владельца с даты покупки. Гарант отремонтирует или, по своему усмотрению, заменит любое устройство, которое, по его мнению, требует обслуживания. Это устройство должно быть отправлено поручителю за счет потребителя. Гарант вернет отремонтированный или замененный блок покупателю за его счет.Затраты на оплату труда дилерского обслуживания или замену несет владелец. Эти гарантии заменяют все другие гарантии, явные или подразумеваемые, и ALL-O-MATIC INC не несет ответственности за косвенный ущерб. Настоящим отказываются от всех подразумеваемых гарантий товарной пригодности и / или пригодности для определенной цели. Это ограничение не действует в юрисдикциях, в которых не допускается ограничение случайных или косвенных убытков или ограничение гарантийных сроков.Внимание, чтобы получить эту политику, заполните регистрационную карточку и отправьте ее по почте в течение 30 дней с момента покупки у ALL-O-MATIC INC. Или у вашего УСТАНОВЩИКА. Если это не зарегистрировано, будет предоставлена ​​гарантия только на один год на все детали.



Слайдер переменного тока SL-100 Артикулы

ЛИНИЯ ПУНКТ SL-100AC НАИМЕНОВАНИЕ ДЕТАЛИ НОМЕР ДЕТАЛИ
1 ТОЛЬКО РАМА SL-101FM
КОРОБКА ПЕРЕДАЧ
2 КОРОБКА ПЕРЕДАЧ GBX-100
3 ШКИВ КОРОБКИ ПЕРЕДАЧ PLY-5
4 ЗВЕЗДА ПРИВОДА КОРОБКИ ПЕРЕДАЧ 41B22X78
5 ВСТАВКА КОРОБКИ ПЕРЕДАЧ GCI-102
6 СБРОС КОРОБКИ ПЕРЕДАЧ GCR-102
ДВИГАТЕЛЬ переменного тока с одной крышкой
7 ДВИГАТЕЛЬ переменного тока 1/2 л.с. MTR-1050
8 ШКИВ ДВИГАТЕЛЯ ПЕРЕМЕННОГО ТОКА 1/2 л.с. PLY-2
9 РЕМЕНЬ ДВИГАТЕЛЯ переменного тока 1/2 л.с. 4L-300 (AX28)
10 ЖГУТ ПРОВОДА ДВИГАТЕЛЯ ПЕРЕМЕННОГО ТОКА 1/2 л.с. MTR-h202
БЛОК УПРАВЛЕНИЯ CBX-AY102
11 БЛОК УПРАВЛЕНИЯ CBX-102
12 КРЫШКА БЛОКА УПРАВЛЕНИЯ CBC-102
13 БЛОК УПРАВЛЕНИЯ ПЛАТА УПРАВЛЕНИЯ ПЕРЕМЕННОГО ТОКА ACPCB-UL
14 БЛОК УПРАВЛЕНИЯ РАДИОПРИЕМНИК COM-1003
15 КНОПКА СБРОСА БЛОКА УПРАВЛЕНИЯ COM-1004
16 БЛОК УПРАВЛЕНИЯ СИГНАЛИЗАЦИЯ ЗУММЕР COM-1005
17 БЛОК УПРАВЛЕНИЯ ВЫКЛЮЧАТЕЛЬ ПИТАНИЯ COM-1000
18 БЛОК УПРАВЛЕНИЯ 14-КОНТАКТНАЯ КЛЕММА COM-1002
ТАБЛИЦА КОНЕЧНЫХ ВЫКЛЮЧАТЕЛЕЙ LST-AY100
19 КОНЕЧНЫЙ ВЫКЛЮЧАТЕЛЬ ПЛАСТИКОВАЯ ГАЙКА COM-1008
20 ТАБЛИЦА ПРЕДЕЛЬНЫХ ВЫКЛЮЧАТЕЛЕЙ LST-100
21 ПЛАСТИНА КОНЕЧНОГО ВЫКЛЮЧАТЕЛЯ LSP-100
22 ПРУЖИНЫ КОНЕЧНОГО ВЫКЛЮЧАТЕЛЯ (2 ШТ.) SPG-7575
23 КОНЕЧНЫЙ ВЫКЛЮЧАТЕЛЬ COM-1007
24 КОНЕЧНЫЙ ВЫКЛЮЧАТЕЛЬ ЖГУТ ПРОВОДОВ LSH-102
ИСТОЧНИК ПИТАНИЯ
25 ИСТОЧНИК ПИТАНИЯ 110 ВЫХОД COM-1001
26 ЖГУТ ПРОВОДОВ ПИТАНИЯ PSH-102
27 КРЫШКА ВЫХОДНОЙ ПИТАНИЯ PSC-102
РАЗНОЕ
28 НАРУЖНАЯ ПЛАСТИКОВАЯ КРЫШКА EPC-100
29 ПЛАСТИКОВЫЙ ХОЛОДИЛЬНИК ЦЕПИ COM-1017
30 КРОНШТЕЙН ЦЕПИ (1 ШТ.) COM-1009
31 БОЛТ ЦЕПИ (1 ШТ.) COM-1010-1

Ремонт автоматических ворот и установка привода Саратога

Ищете рядом с собой электрические открыватели для ворот? Или вы ищете компании по ремонту автоматических ворот в Саратоге? Как узнать, какая компания лучшая в игре? Что ж, вы можете убедиться в этом сами, прочитав о наших услугах. Bay Area Lions Gate предлагает ремонт и техническое обслуживание, а также установку автоматических ворот с электроприводом для проезжей части и промышленных ворот для любого объекта.

Моторизованные автоматические открыватели ворот экономят ваше время, энергию и защищают вас от любого несанкционированного проникновения на ваш объект. Они прикреплены к электрическим приводам с различными компонентами, которые приводят в действие автоматические ворота. Каждый из этих компонентов и сам двигатель ворот время от времени требуют обслуживания и ремонта.Если вы хотите заменить его детали или что-то исправить, мы это сделаем.

Мы устанавливаем автоматические открыватели ворот вместе с контурами выхода, датчиками ворот и резервными источниками питания для двигателя ворот. Наши самые распространенные марки открывателей ворот — Ramset, Linear, Multicode, FAAC и All-o-Matic.

Регулярное обслуживание автоматических ворот

Как одна из лучших компаний по ремонту автоматических ворот, мы также обеспечиваем наших клиентов регулярным обслуживанием автоматических ворот, что означает замену и ремонт любых деталей, которые могут быть неисправны.К ним относятся сломанные ручки, неровные дорожки ворот, старые и поврежденные стойки, замена колес или пружин ворот и даже замена сгнившего железного ограждения. Это подводит нас к еще одной из предлагаемых нами услуг.

Забор из кованого железа в Саратоге

Если вы хотите построить забор вокруг своего дома или любого участка или даже установить железные перила на лестнице, настиле или воротах, мы — компания для вас! Наши подрядчики по забору — одни из лучших в городе. Мы беремся за разные проекты заборов, а наши сварщики — одни из самых опытных в штате.Вы можете обсудить свой проект с нашими подрядчиками по забору, и они построят его в кратчайшие сроки. Кроме того, мы также изготавливаем электрические ворота на заказ. Встретьтесь с одним из наших подрядчиков, поделитесь с ним своими идеями. Они дадут вам предложения и будут работать с вами, чтобы воплотить в жизнь то, что вы разрабатываете.

Система доступа и система удаленного контроля доступа

Хотите защитить свой объект от грабителей, злоумышленников и любого вреда? Хотите ограничить и контролировать доступ к вашему месту только вам и явно разрешенным людям? Не волнуйтесь, наша система внутренней связи и удаленного доступа сделает всю работу за вас.Устанавливаем домофоны и систему удаленного контроля доступа, а также автоматические ворота. Предлагаем отремонтировать, заменить

или установить клавиатуру, телефон или любой другой тип домофона на ваш выбор. Мы также можем подключить систему контроля доступа по карте, которая лучше всего подходит для коммерческих объектов.

Мы понимаем, насколько важен момент для систем безопасности, особенно для автоматических ворот. Любая проблема с электрическими воротами делает все ваше предприятие уязвимым для любой угрозы.Вот почему у нас есть круглосуточный доступный контактный номер для экстренной помощи, по которому вы можете позвонить в любое время, и технический специалист сразу же приедет для решения проблемы.

Теперь вам, наверное, интересно, что отличает нас от других компаний по ремонту автоматических ворот. Мы занимаемся этим бизнесом много лет, а это значит, что мы не только имеем опыт, но и знаем, что и где работает лучше всего. Мы лучше знаем и понимаем все, что связано с автоматическими воротами и системами безопасности. Наши подрядчики чрезвычайно квалифицированы, работают со 100% честностью, порядочностью и преданностью делу по конкурентоспособным ценам.Мы работаем, чтобы предоставить вам отличный сервис и продукцию, удобные для клиентов. Итак, свяжитесь с нами сегодня по телефону или электронной почте.

% PDF-1.4 % 2431 0 объект > эндобдж xref 2431 73 0000000016 00000 н. 0000003084 00000 н. 0000003247 00000 н. 0000003817 00000 н. 0000003900 00000 н. 0000004053 00000 н. 0000004206 00000 н. 0000004362 00000 п. 0000004518 00000 н. 0000004673 00000 н. 0000004829 00000 н. 0000004984 00000 н. 0000005129 00000 н. 0000005670 00000 н. 0000006109 00000 п. 0000006762 00000 н. 0000006944 00000 н. 0000006983 00000 н. 0000007098 00000 н. 0000007211 00000 н. 0000007240 00000 н. 0000007542 00000 н. 0000008019 00000 н. 0000008590 00000 н. 0000008678 00000 н. 0000009320 00000 н. 0000009987 00000 н. 0000010072 00000 п. 0000010578 00000 п. 0000010970 00000 п. 0000012235 00000 п. 0000013425 00000 п. 0000014570 00000 п. 0000015843 00000 п. 0000017091 00000 п. 0000018321 00000 п. 0000019587 00000 п. 0000019965 00000 п. 0000021210 00000 п. 0000024593 00000 п. 0000025091 00000 п.